本研究室で用いられる実験技術

      (プロトコールは随時追加します)


遺伝子工学

  大腸菌からのプラスミド少量精製 (Mini-prep)  

  大腸菌からのプラスミド大量精製 (Midi-prep)

  シークエンス (Sequence)

  当研究室で使用している主なプラスミド

                  pcDNA3-FLAG (5’)

                                -HA (5’)

                                -V5 (5’)

                                -Myc (5’)

                                -6Myc (5’)

                                -FLAG / HA (5’)

                                -FLAG / HA (3’)

                  pcDEF3

                  pCAG-IP (BMX)

                  pSUPER.puro

                  pEGFP-C3 (EX)

                  pDsRed-C1

                  pmKate2-N

                  pmKate2-C

                  pGEX-4T1

                  pBluescript (SK+)

                  Litmus 28

  shRNA配列を自分で選ぶ方法

  GST融合タンパクの精製 (GST fusion protein)

  制限酵素を用いたプラスミドコンストラクション

  コンピテント細胞のつくりかた

  レンチウィルベクターの作製 (Lentivirus vector)

     遺伝子発現用ベクターの構築

     shRNAによるノックダウンベクターの構築

     ウィルスの調製

  

分子生物学

  ウェスタンブロッティング (Western blotting)  

  免疫沈降法 (Immunoprecipitation) 

  DNAアフィ二ティー沈降法 (DNAP) 

  結合タンパク精製法

  ルシフェラーゼアッセイ (Luciferase assay)

  培養細胞からのDNA抽出法 (Extraction of genomic DNA)

  培養細胞からのRNA抽出法 (Extraction of RNA)

  パラフィンブロックからのDNA抽出法 (TaKaRa DEXPAT)

  RT-PCR (Semi-quantitative) 

  リアルタイムPCR (Real time PCR)  

  培養細胞の免疫染色 (Immunofluorescene)

  SA-b-gal staining

  CHIP (Chromatin Immunoprecipitation)

  FACSによる解析

     細胞周期 (PI染色)

     細胞膜抗原の発現解析

     細胞内活性酸素の測定


細胞生物学

  細胞培養 (Cell culture)

  ES細胞の血管内皮細胞への分化

  Fugene6による遺伝子導入

       siRNAによる遺伝子ノックダウン

  3次元培養法 (3D-culture)

  Wound healing assay

  マトリジェル浸潤アッセイ(Matrigel invasion assay)

  Sphere formation assay


マウス

  マウス尾からのDNA抽出 (Extraction of DNA from mice tail)

  がん細胞のマウスへの移植 (Transplantation of Tumor)

  尾静注による肺への転移

  ケラチノサイトの樹立 (Keratinocyte culture)


病理学

  HE染色 (HE staining)  

  免疫組織化学 (Immunohistochemistry)


モノクローナル抗体作製

  マウスの免疫 (Immunization)  

  細胞融合 (Fusion)

  スクリーニング (Screening)

  抗体の大量調製


当研究室で作製したプラスミド、抗体リスト